کیت استخراج پلاسمید
در این مطلب هر چیزی که نیاز دارید درباره کیت استخراج پلاسمید از خرید این کیت گرفته تا کار با کیت استخراج پلاسمید و کاربرد های پلاسمید برای شما جمع آوری کرده ایم .
خرید کیت استخراج پلاسمید
برای خرید کیت استخراج پلاسمید یا دیگر کیت هایی که نیاز دارید میتوانید به سراغ صفحه اصلی ریسرچ کالا بروید و تمامی محصولات را مشاهده و قیمت های هر شرکتی که در این حوزه فعالیت دارد را با قیمت روز کیت مشاهده بفرمایید و شما نیز محصولات خود را به فروش بگذارید
در صورت هرگونه مشکلی نیز میتوانید با شماره ما نیز تماس بگیرید : 02128428668
پلاسمید چیست؟
اصطلاح “پلاسمید” توسط جوشوا لدربرگ در سال 1592 ابداع شد. در ابتدا از باکتریها ، پلاسمیدها و عناصر ژنتیکی اکستراکروموزومی موجود در اکثر گونه های Archae ، Eukarya و Eubacteria به دست می امد که می توانستند به طور مستقل تکثیر شوند. پلاسمیدها مولکول DNA دو رشته ای دایره ای هستند که از سلولهای کروموزومی DNA متمایز هستند. در حالی که کروموزوم ها بزرگ هستند و شامل کلیه اطلاعات ژنتیکی ضروری برای زندگی در شرایط عادی هستند ، پلاسمیدها معمولاً بسیار اندک هستند و فقط شامل ژن های اضافی هستند که ممکن است در موقعیت ها یا شرایط خاص مفید باشند.
ساختار و عملکرد سلول باکتریایی توسط ماده ژنتیکی موجود در DNA کروموزومی هدایت می شود. پلاسمیدها بطور کلی برای بقای باکتری میزبان ضروری نیستند. پلاسمیدها صفاتی را مشخص می کنند که به میزبان اجازه می دهد تا در محیطهایی پایدار بماند که در غیر این صورت کاهش دهنده یا مرگ آور باشد. به عنوان مثال مقاومت آنتی بیوتیکی و بیان پروتئین ژنهای مقاومت آنتی بیوتیکی غالبا توسط پلاسمید رمزگذاری می شوند ، که به باکتری اجازه می دهد در محیط حاوی آنتی بیوتیک بماند ، در نتیجه باکتری مزیت رقابتی نسبت به گونه های حساس به آنتی بیوتیک فراهم می کند.
تاریخچه
اصطلاح پلاسمید در سال 1952 توسط زیست شناس مولکولی آمریکا جوشوا لدربرگ معرفی شد تا به “هر عامل ارثی برون یابی خارج از کروموزوم” مراجعه شود. استفاده اولیه این اصطلاح شامل هر ماده ژنتیکی باکتریایی است که حداقل برای بخشی از چرخه تکثیر آن وجود دارد. این توضیحات شامل ویروس های باکتریایی هم هست ، مفهوم پلاسمید با گذشت زمان اصلاح شد و عناصر ژنتیکی که به طور مستقل تولید می شوند در دسته ی پلاسمیدها قرار گرفت.
بعداً در سال 1968 ، تصمیم گرفته شد که اصطلاح پلاسمید به عنوان اصطلاح عنصر ژنتیکی برون یابی ، اتخاذ شود و برای تمایز آن از ویروس ها ، این تعریف به عناصر ژنتیکی محدود شد که بطور انحصاری یا غالب در خارج از کروموزوم وجود دارند و می توانند تکثیر مستقل داشته باشند.
کاربرد پلاسمید
به عنوان یک ابزار ، پلاسمیدها می توانند برای بیان پروتئین مورد علاقه اصلاح شوند (به عنوان مثال ، تولید انسولین انسانی با استفاده از فناوری DNA نوترکیب).
پلاسمیدها به عنوان یک سیستم مدل ارزشمند برای مطالعه فرایندهایی از قبیل تکثیر DNA ، جداسازی ، ترکیب و تکامل خدمت کرده اند. پلاسمیدها به عنوان ابزاری برای کلون سازی ژن و به عنوان وسیله ای برای بیان ژن در فن آوری مدرن DNA نوترکیب مهم هستند.
پلاسمیدهای مصنوعی به طور گسترده ای به عنوان ناقل در کلونینگ مولکولی مورد استفاده قرار می گیرند ، و در جهت تکثیر توالی DNA نوترکیب در ارگانیسم های میزبان استفاده می شوند. در آزمایشگاه ، پلاسمیدها از طریق تبدیل به سلول وارد می شوند.
ویژگی های پلاسمید
پلاسمیدهای موجود در باکتری از نظر خصوصیات بدنی مانند اندازه (kbp) ، هندسه و تعداد کپی متفاوت هستند.
اندازه پلاسمید
پلاسمیدها در اندازه از 1 kbp (کیلو جفت باز) تا 1000 (کیلو جفت باز) مگاپلاسمید هستند که اندازه آنها صدها جفت باز است.
هندسه پلاسمید
اگرچه بیشتر پلاسمیدها دارای هندسه دایره ای هستند ، اما اکنون نمونه های زیادی از پلاسمیدها وجود دارد که در انواع باکتری ها بصورت خطی هستند. DNA پلاسمید ممکن است در یکی از پنج ساختار DNA دایره بازی که برش یک رشته دارد ، DNA دایره ای آرام با هر دو رشته بطور کامل دست نخورده ، اما با آرامش آنزیمی آرام شده است ، DNA خطی دارای انتهای آزاد است ، DNA superercoiled با هر دو ریز دست نخورده است ظاهر شود.
شماره کپی پلاسمید
تعداد کپی به تعداد متوسط یا مورد انتظار نسخه در هر سلول میزبان اشاره دارد. پلاسمیدها تعداد کپی کم ، متوسط یا زیاد هستند. دانستن اینکه کدام دسته از پلاسمیدها در آن قرار می گیرند ، هنگام شروع آزمایش بسیار مهم است. در باکتری با پلاسمیدهای دارای تعداد کپی بالا ، در طول تقسیم سلولی پلاسمیدها بطور تصادفی در سلولهای دختر جدا می شوند ، در حالی که باکتری با تعداد کپی های پایین در حین تقسیم سلولی و پارتیشن پلاسمیدها به طور مساوی در سلولهای دختر تقسیم می شوند. مزیت تعداد کپی بالا پایداری بیشتر پلاسمید در هنگام تقسیم بندی تصادفی (یعنی تقسیم پلاسمیدها به سلول های دختر) در تقسیم سلولی است.
استخراج پلاسمید
پلاسمید ها اغلب برای خالص سازی یک توالی خاص استفاده می شوند ، زیرا به راحتی می توانند به دور از بقیه ژنوم خالص شوند. برای استفاده از آنها به عنوان حامل و برای کلونینگ مولکولی ، پلاسمیدها اغلب باید جدا شوند.
چندین روش برای جداسازی DNA پلاسمید از باکتری ها وجود دارد ، از miniprep گرفته تا حداکثر یا جرم شکاف. اولی را می توان مورد استفاده قرار داد تا به سرعت تشخیص دهد که آیا پلاسمید در هر یک از چندین کلون باکتریایی صحیح است یا خیر.
در حالت دوم ، حجم بسیار بیشتری از سوسپانسیون باکتریایی رشد می کند که از آن می توان حداکثر آمادگی را انجام داد. در اصل ، این یک miniprep مقیاس دار است که به دنبال آن تصفیه اضافی نیز انجام می شود. این منجر به مقادیر نسبتاً زیادی (چند صد میکروگرم) DNA پلاسمید بسیار خالص می شود.
جداسازی پلاسمید
جداسازی DNA پلاسمید از باکتریها یک روش مهم در زیست شناسی مولکولی است و در بسیاری از مراحل مانند کلونینگ ، تعیین توالی DNA ، ترانسفکشن و ژن درمانی یک گام اساسی است. این دستکاری ها نیاز به جداسازی DNA پلاسمید با خلوص بالا دارند. DNA پلاسمید خالص می تواند برای استفاده فوری در کلیه مراحل بیولوژی مولکولی مانند هضم با آنزیم های محدود کننده ، کلونینگ ، PCR ، ترانسفکشن ، در ترجمه آزمایشگاهی ، بلات و توالی مورد استفاده قرار گیرد.
ترتیب قرار گیری لایه های بیومولکولها پس از شست و شو
لیز قلیایی روشی است که در زیست شناسی مولکولی ، برای جدا کردن DNA پلاسمید یا سایر اجزای سلولی مانند پروتئین ها با شکستن سلول ها به کار می رود. ابتدا باکتریهای حاوی پلاسمید مورد علاقه رشد داده می شوند و سپس با یک بافر لیز قلیایی متشکل از یک ماده شوینده سدیم سولفات سدیم (SDS) و یک هیدروکسید سدیم باز قوی لیز می شوند. این مواد شوینده ، لایه پشت سرمی فسفولیپید غشاء را جدا می کنند و قلیایی پروتئین هایی را که در حفظ ساختار غشای سلولی نقش دارند ، دفع می کند. از طریق یک سری مراحل شامل تحریک ، رسوب ، سانتریفیوژ و از بین بردن مایع رویی ، بقایای سلولی برداشته شده و پلاسمید جدا شده و تصفیه می شود.
انواع کیت استخراج پلاسمید
کیت های تجاری زیادی برای انجام استخراج پلاسمید در مقیاس های مختلف ، خلوص و سطوح اتوماسیون ایجاد شده است. کیت استخراج و تخلیص پلاسمید/ وکتور برپایه استفاده از ستون و بافر آواژن شامل ستون ها و ویال های نوکلئاز-فری، بافرهای لیز، اتصال به ستون ، شستشو وبافر رهایش از ستون می باشد.
منابع
https://en.wikipedia.org/wiki/Plasmid#cite_note-finbarr-5
https://www.mybiosource.com/learn/testing-procedures/plasmid-isolation
